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正置荧光显微镜的滤色系统是如何工作的?

时间:2020-10-08 作者:华商兄弟 点击:

                                                       

正置荧光显微镜是以紫外线为光源,用以照射被检物体,使之发出荧光,然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。

用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。

细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,正置荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

正置荧光显微镜的滤色系统

滤色系统是荧光显微镜的重要部位,由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号,各显微镜厂家名称常不统一。

滤板一般都以基本色调命名,前面字母代表色调,后面字母代表玻璃,数字代表型号特点。

如德国产品(Schott)BG12,就是种蓝色玻璃,B是蓝色的第一个字母,G是玻璃的第一个字母;

我国产品的名称已统一用拼音字母表示,如相当于BG12的蓝色滤板名为QB24,Q是青色(蓝色)拼音的第一个字母,B是玻璃拼音的第一个字母。

不过有的滤板也可以透光分界滤长命名,如K530,就是表示压制滤长530nm以下的光而透过530nm以上的光。

还有的显微镜厂家的滤板完全以数字命名,如美国Corning厂的NO:5-58,即相当于BG12。

1.激发滤板根据光源和荧光色素的特点,可选用以下三类激发滤板,提供一定波长范围的激发光。

  紫外光激发滤板:此滤板可使400nm以下的紫外光透过,阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5,外加一块BG-38,以除去红色尾波。

  紫外蓝光激发滤板:此滤板可使300~450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3,外加BG-38。

  紫蓝光激发滤板:它可使350~490nm的光通过。常用型号为QB24(BG12)。

  最大吸收峰在500nm以上者的荧光素(如罗达明色素)可用蓝绿滤板(如B-7)激发。开始采用金属膜干涉滤板,由于针对性强,波长适当,因而激发效果比较玻璃滤更好。

    激发滤板分薄厚两种,一般暗视野选用薄滤板,亮视野荧光显微镜可选用厚一些。基本要求是以获得最明亮的荧光和最好的背景为准。

2.压制滤板压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过,提供相应波长范围的荧光。与激发滤板相对应,常用以下3种压制滤板:

  紫外光压制滤板:可通过可见光、阻挡紫外光通过。能与UG-1或UG-5组合。

  紫蓝光压制滤板:能通过510nm以上波长的光(绿到红),能与BG-12组合。

  紫外紫光压制滤板:能通过460nm以上波长的光(蓝到红),可与BG-3组合。

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